皂苷Rg1( 批号0703-200117)、人参皂苷Rb1( 批号704-200114)、人参皂苷R1( 批号0745-200007),均为化学对照品、含量测定用,中国药品生物制品检定所提供。 2 实验方法与结果 2.1 色谱分析条件 Luna C18(2)分析柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相(A)-乙腈(B)0.05%磷酸梯度洗脱,0~8min(20%A,80%B),8~20min(20%A~40%A,80%B ~60%B),20~30min(40%A~20%A,60%B ~80%B),30~36min(20%A~100%A,80%B ~0),36~50min(100%A),50~60min(100%A~20%A,0 ~80%B),流速1.0mL/min,检测波长203nm。所有组分均在70min内洗脱出柱。 2.2 溶液制备 供试品溶液的制备精密称取三七药材粉末(过100目筛)0.25g: 置50ml, 具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,精密称定,超声30min,放冷,精密称定,用甲醇补足减失重量,精密加入咖啡因内标液0.5mL,,混匀,滤过。取续滤液,经0.45μm有机系微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。 内标液制备 精密称取咖啡因0.02571g,置100mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。 对照品溶液的制备 精密称取对照品三七皂苷R13.94mg、人参皂苷Rg1 12.73mg、人参皂苷Rb1 13.82mg置25mL量瓶中,精密加入咖啡因内标液1.0mL加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取5mL置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,经0.45μm有机系微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。 2.3 系统适用性实验与精密度考察 取对照品溶液进样分析,色谱图见图,分离效果好,以人参皂苷Rg1峰计算,理论塔板数大于270000,连续重复进样6次,计算峰面积的精密度:三七皂苷R1为1.1%、人参皂苷Rg1为1.1%、人参皂苷Rb1为1.0%。 2.4 三七HPLC-FP的重现性与稳定性试验 取同一批药材(购于云南昆明,(3年生,40头)3份,按上述2.2方法制备供试品溶液,进样并记录色谱图,计算1,2,3,6,10,12,13号峰相对于内标峰S的相对保留时间和相对峰面积,结果显示各峰相对保上一页 [1] [2] [3] 下一页 |
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