留时间的RSD均在1.0%以下,相对峰面积的RSD为1.0%~3.8%。取重现性试验第1份样品溶液相隔0,2,4,8,24h分别进样检测,计算相对保留时间和相对峰面积,结果显示供试品的指纹图谱在24h内基本稳定,各峰相对保留时间的RSD均在1.0%以下,相对峰面积的RSD为0.8%~3.7%。 2.5 三七药材的HPLC-FP的建立 取不同产地、不同规格的三七样品及其常见伪品,分别按上述2.2方法制备供试品溶液,进样并记录指纹图谱图。结果21批药材均显示与参考指纹图谱有相同的特征峰,其13个共有特征峰的相对保留时间的RSD均低于1.0%,说明参考指纹图谱中各特征峰为三七药材的共有成分。采用SPSS软件对21批三七药材的HPLC-FP中各特征峰的相对峰面积进行聚类分析,以夹角余弦为测度的聚类图结果见图,利用Excell软件,分别采用欧氏距离、相关系数和夹角余弦作测度,以1,6,2,4,8,21,11,9,5号样品为标准样本,计算所有样品的相似度。 3 结果与讨论 3.1 三七常见伪品———姜黄、高良姜、郁金、三棱、白术、白芷、白及、莪术的HPLC图与三七的HPLC-FP比较,在此色谱条件下上述伪品均无三七的特征峰,采用此法可以方便地鉴别真伪。 3.2 通过系统聚类分析该HPLC-FP的特征峰数据的系统聚类结果为:4,8,21,11,9,5号样品为地道药材优质品,质量最好,1,6,2号样品为地道药材,质量较好,10,15,19号样品为次品,质量最次,12,16,17,3,20,7,14,13,18号样品为市售一般品,系统聚类结果与药材的道地性和生药学鉴定结果相吻合。 3.3 通过对三七HPLC-FP特征峰的重现性和稳定性研究和相似度计算(分别以夹角余弦、相关系数和欧氏距离为测度),21个三七样品的相似度均在0.9~1,其常见伪品的相似度均低于0.9,该方法可作为评价三七质量的高效液相色谱指纹图谱。 3.4 该HPLC-FP成功地选择了咖啡因作为内标物,在量上给出了各特征峰相对于内标的相对含量,可用于指导三七的使用,保证疗效。
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