【摘要】 目的建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法：针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因，自行设计了两对引物，采用双重PCR同时扩增上述基因，用8g／L羟丙基甲基纤维素为筛分介质，在50cm×100μm i．d．涂壁毛细管中，于一10kV电压下用激光诱导荧光-毛细管电泳检测转基因大豆的PCR扩增产物。结果在优化的PCR反应和毛细管电泳条件下，本法可以同时检测出转基因大豆样品中三种外源基因，双重PCR扩增产物经测序证实与原基因序列完全一致，表明本研究设计的引物合理，扩增结果可靠。毛细管电泳进样量仅需5nl，分析时间为24min，迁移时间的相对标准偏差≤3.2。结论本方法较常规琼脂糖凝胶电泳特异性高，分析时间短，重现性好，检测灵敏，适合于大豆中转基因成分的快速检测。
【关键词】双重PCR；激光诱导荧光-毛细管电泳；转基因大豆PCR产物检测；羟丙基甲基纤维素
随着转基因农作物的大量种植，其安全性问题也日益受到人们的重视。2002年我国要求对转基因农作物实行标签管理。抗草甘膦(glyphosate)大豆(商品名，roundup ready soybean)是在传统大豆株Variety A5403中转入外源基因CAMV-35S启动子、抗草甘膦基因CP4-EPSPS和NOS终止子而得到。它是使用最广的转基因作物之一，每年至少有800万吨转基因大豆进入我国市场。因此，研究抗草甘膦大豆的快速检测方法具有重要意义。目前采用PCR检测转基因大豆的方法是采用琼脂糖凝胶电泳法，首先检测CAMV-35S启动子和NOS终止子进行筛选，然后检测EPSPS抗草甘膦基因，操作烦琐、费时。本研究利用双重PCR技术同时扩增上述基因片段，用激光诱导荧光-毛细管电泳高效、快速检测PCR产物，显著提高了检测效率，并使灵敏度大为增加。本方法所需样品量少(nl级)，快速、灵敏和准确，已成功用于实际转基因大豆样品的分析。
1 材料和方法
1．1 仪器与试剂
毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置(自行组装)，其中氦氖激光器(543.5nm，JDS Uniphase，USA)参数控制和数据采集用本实验室编制的windows软件控制。石英毛细管(河北永年光导[1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 |
|
|
|
| 文章为中药网整理,或来自网络,内容仅供访问者参考, 版权归原作者所有 , 转载请注明出处！互动交流请进中药论坛！ |
相 关 文 章
