纤维厂)：长50cm和40cm，有效长度为43 cm和32cm，内径分别为50μm、75μm 和100μm，外径为375μm。毛细管柱内表面的聚丙烯酰胺化学键合涂层由本实验室完成。UNO 型PCR仪(德国Biometre公司)，PAC3000型电泳仪(美国BIO RAD公司)，UVI紫外成像分析仪(英国UVI公司)。
阳性抗草甘膦转基因大豆标准物质(IRMM-410R，Fluka公司)、进口转基因大豆样品和非转基因大豆由国家进出口商品检验研究所提供；溴乙锭，羟丙基甲基纤维素(hydroxy-propylmethacrylate，HPMC-4000)，Sulforhdamine B(美国Sigma公司)；三羟甲基氨基甲烷(Tris，上海化学试剂总厂)，乙二胺四乙酸，硼酸(分析纯，成都化学试剂公司)；Taq DNA 聚合酶，dNTPs，pUC19DNA／Msp I(HpaⅡ)Marker(晶美生物工程有限公司)。所用水均为无菌重蒸水。
1．2 寡核苷酸引物
在充分了解抗草甘膦转基因大豆引入的外源基因的基础上，利用Primer premier5．0软件自行设计了两对引物。引物ZY1-35S和ZY2-EPSPS扩增35S和cp4-EPSPS之间的片段，引物ZY3-NOS和ZY4-NOS扩增NOS终止子序列。内源基因Lectin基因引物按文献设计。上述3对引物的序列信息由上海博亚生物技术有限公司合成。
1．3 实验方法
1．3．1 总DNA提取 参照文献，用CTAB法提取植物总DNA。
1．3．2 PCR体系及反应条件 双重PCR反应体系：1×buffer，2.5mmol／L MgC12，0.25mmol／L dNTP，primers(0.4 μmol／L ZY1-35S，ZY2-EPSPS和0.4 μmol／L ZY3-NOS，ZY4-NOS)，1.5units of Taq DNA Polymerase(MBI)，模板DNA100～200ng，总反应体积25μ1。PCR循环参数：95℃预变性3min；95℃ 45s，55℃ 60s，72℃ 45s，共35循环；72℃延伸5min。
内源基因(Lectin)的PCR 反应体系：1×buffer，2.0mmol／L MgC12，0.2mmol／L dNTP，0.2μmol／L prim上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 |
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