相似度作为目前中药指纹图谱的一个重要评价参数,可以最大限度地避免主观因素的影响,从而实现对指纹图谱整体相似性的客观定量评价。本文采用国家药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A 版,对10 批药材的相似度进行计算,结果表明10 批药材的相似度在0.98 以上。
3 讨 论
3.1 供试品溶液的制备
玄参药材中的有效成分主要为肉桂酸、葡萄糖苷类,通过对不同浓度的甲醇、乙醇等提取溶剂进行考察,表明无水乙醇的提取效率最优。对多种提取方法的考察表明冷浸提取方式耗时长,提取效率不高,而超声提取与加热回流相比,提取效率相仿,且操作简单。
3.2 参照物的选择
玄参中的特征性成分肉桂酸含量较高且稳定,其色谱峰与其他峰分离良好,各批样品中均有此峰,保留时间适中,故选作参照物。
3.3 流动相及洗脱梯度的选择
玄参中所含的化学成分如肉桂酸等在紫外- 可见光区有较强的吸收,可用常规的UV 检测。经对DAD 三维光谱图考察,在280 nm 处各吸收峰吸收均较强,故选其为检测波长;在400 nm 处供试品没有吸收,因此选择其为参比波长。玄参所含化学成分复杂,难以找到理想的等度洗脱条件。为使尽可能多的化学成分得以在指纹图谱中体现,因此采用梯度洗脱。在充分考虑药材中各种化学成分理化性质的基础上,参考相关文献,考察了甲醇- 水、乙腈-水、甲醇- 冰醋酸水和甲醇- 甲酸水等多种色谱系统和梯度洗脱程序,以出峰多、分离好,并确保主要化学成分在指纹图谱中出现为标准,最终确定HPLC的检测条件。
3.4 指纹图谱的建立
10 批次玄参药材指纹图谱表明:不同批次药材指纹图谱相似度虽然在0198 以上,但各成分相对含量仍然存在差异,这种差异可在其指纹图谱中得以清晰、定量的反映,说明指纹图谱不失为控制中药和天然药物质量的有效手段之一。同时也说明制定指纹图谱标准时所采用的药材必须遵循“五固定”的原则,才可确保方法的重现性,从而为玄参药材的鉴别提供可控、可行的手段。
3.5 指纹图谱各色谱峰的定性
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