葛根的含量测定
高效毛细管电泳法测定葛根及其制剂脑得生片中葛根素的含量
摘要:目的：测定葛根(野葛、粉葛)及其制剂脑得生片中葛根素的含量。方法：采用高效毛细管电泳法,双氯灭痛为内标物。测定条件为:运行缓冲液:30mmol/L硼砂缓冲溶液(pH 9.37);操作电压30 kV ,紫外检测波长254nm。结果：葛根素的线性范围为10～100μg/ml,葛根的平均回收率为96.77%( RSD2.65% ,n=3) ;脑得生片平均回收率为:100.64%( RSD 0.28% ,n= 3) 。结论：该方法简便、快捷,具有良好的精密度、回收率和线性关系,结果满意。
关键词:高效毛细管电泳;葛根素;脑得生片
脑得生片是中国药典2000年版一部收载成药,处方中含葛根,具有活血化淤、疏通经络、醒脑开窍之功效,用于脑动脉硬化、缺血性脑中风及脑出血后遗症等。脑得生片原标准中无葛根素的含量测定。高效毛细管电泳法(HPCE 法)具有分析周期短、消耗溶剂少、费用低、抗污染能力强的优点,适宜于葛根及其制剂中葛根素的快速定量分析。本实验
以双氯灭痛为内标测定了葛根及其制剂脑得生片中
葛根素的含量。
1 仪器和试剂
Beckman P/A system 5000型毛细管电泳仪(美国Beckman 公司);融熔石英毛细管柱75μm×77cm。硼砂(分析纯),甲醇(色谱纯)。葛根素、双氯灭痛对照品(中国药品生物制品检定所)。
2 操作条件
运行缓冲液:30mmol/L硼砂溶液;操作电压30kV,极性由正到负,紫外检测波长254nm,柱温25℃;采用压力进样,进样时间5s。
毛细管冲洗方法:开机后用0.1mol/L氢氧化钠溶液冲洗2min ,运行缓冲液2min。每次测定之间运行缓冲液冲洗1 min。
3 测试溶液的制备
3. 1 对照品贮备溶液的制备
精密称定葛根素对照品12.5mg,用甲醇定容成浓度为0.5mg/ml的对照品溶液。
3. 2 内标溶液的制备
精密称定双氯灭痛一定量,加甲醇配成180μg/ml的溶液,备用。
3. 3 样品溶液的制备
3. 3. 1 取葛根生药粉0.1g,精密称定,精密加入内标溶液50ml,称定重量,超声处理1h,放冷,加甲醇补足重量,静置,取上清液作为样品溶液。
3. 3. 2 取脑得生10片,除去包衣,研细混匀,精密称定0.2g,精密加入内标溶液25ml,称定重量,超声处理1h,放冷,加甲醇补足重量,静置,取上清液作为样品溶液。
3. 4 阴性溶液的制备
按处方比例和脑得生片制备工艺制成不含葛根的脑得生片,照样品溶液制备方法制备阴性溶液。
4 结 果
4. 1 电泳行为
在本实验操作条件下,葛根素,双氯灭痛分离良好,阴性溶液与对照品溶液峰及内标溶液峰没有重叠。
4. 2 线性范围
精密吸取葛根素对照品贮备溶液0.2 ,0.4 ,0.8 ,1.2 ,1.6 ,2.0ml 置于10ml量瓶中,加入内标溶液5.0ml,再加甲醇至刻度,摇匀。以对照品质量浓度x(μg/ml) 为横坐标,以对照品的校正峰面积(峰面积/ 迁移时间,A/t) 与内标的校正峰面积(Ais/ Tis) 之比Y为纵坐标,计算回归方程。葛根素的质量浓度在10～100μg/ml范围内与校正峰面积成线性关系,相关系数r=0.9998 ,表明方法的线性关系良好。回归方程:Y = 0.006211+ 0.01938X ,r =0. 9998。
4. 3 精密度
取低、中、高三个质量浓度的葛根素对照品溶液连续进样3次,校正峰面积的日内精密度RSD 在1.59 %以内,日间精密度RSD在1.83%以内。
4. 4 回收率试验
向已知含量的葛根及在成药的阴性溶液中,精密加入不同量的葛根素溶液,如法测定,计算回收率。
4. 5 样品测定
取不同批次脑得生片以及野葛和粉葛,依法测定。
5 讨 论
野葛中葛根素含量(18.79～25.46mg/g) 明显高于粉葛(0.824～14.32mg/g),而且野葛的质量相对稳定,粉葛的品质不一,葛根素含量变化很大。由试验结果分析,脑得生片中加的是野葛。
高效液相色谱法测定复方葛根片中丹参酮ILA含量
彭学莲 ，耿晖 ，崔苏镇 (1．济南军区总医院，山东济南 250031； 2．山东省立医院，山东济南 250021) 复方葛根片由葛根、丹参等组成，笔者利用高效液相色谱法对所含丹参酮IIA真进行了含量测定，以此作为质量控制指标。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪(美国Waters公司)，包括Waters 2487检测器，Waters600泵；BP211D型电子天平(德国sartorius)；tCQ一600DB型数控超声波清洗器。除高效液相色谱检测所用试剂为色谐纯外，其他试剂均为分析纯；双蒸水为自制。丹参酮nA对照品(批号为0766一200010，中国药品生物制品检定所)；复方葛根片(本院制剂室生产)。 2 方法与结果 2．1 色谱条件 色谱柱：AlltimaC18柱(250mm×4．6mm，5μm)；流动相：甲醇一水(85：15)；流速：1 mL／min；柱温：30％；检測波长：27(3 nm；进样量：20 μL。理论塔板数以丹参酮L峰计算为8 000。 2．2 溶液制备 精密称取丹参酮Ⅱ+对照品12 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，作为对照品溶液，备用。将复方葛根片除去糖衣，研细混匀，取适量精密称定，加甲醇9．5mL，超声提取10rain，用甲醇定容至10 mL，摇匀，再用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。 2．3 方法学考察 线性关系考察：精密吸取对照品溶液O．5，1，1．5，2，2．5 mL，分别置5 mL量瓶中，用甲醇定容。分别取20 μL注入高效液相色谱仪，以进样量(μg为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归，求得回归方程r=1 187761X一3 857．9，r：o．9996。结果表明丹参酮ILA进样量在0．24-1．2μg范围内与峰面积有良好的线性关系。 精密度试验：精密吸取丹参酮IL对照品溶液(36μg／mL)20 μL，重复进样5次，记录峰面积。结果峰面积的RSD=1．1％。 重现性试验：取同一样品，按供试品溶液的制备方法制备5份待测溶液，分别进样20 μL，计算含量。结果的RSD=1．8％。 稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别在O，2，6，12 h时奋进样20μL记录峰面积。结果表明，丹参酮IIA在12 h内稳定。 加样回收试验：精密称取6份已知丹参酮L含量的样品，分别加入适量丹参酮L对照品，按供试品溶液的制备方法制备供试液。精密吸取20 μL进样，记录峰面积，并计算回收率。结果见表1。 阴性对照试验：按处方比例取除去丹参的处方药材，按复方葛根片的制备方法制成阴性对照片剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液，取20 μL进样。结表明，在丹参酮L相同的保留时间处无千扰，色谱图见图l。 2．4 样品含量测定取3批样品适量，依法测定。结果批号为001205，010615，OI1218的3批样品中丹参酮n真含量分别为2．0512,2．1217，2．0763mg／g(n=5)。 3 讨论 3．1 本法简便、快速、灵敏，可作为复方葛根片的质量控制方法。 3．2 流动相的选择采用了药典方法，只是对比例进行了调整，这样使得保留时间缩短，样品分析更迅速。 3．3 样品的处理曾比较了回流提取与超声提取，结果两种提取方法的提取率相当，而超声提取的方法更简单。 |
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