1.利血平粗提液的制备
取干燥的催吐萝芙木根粉2500 g,用2500ml水润湿,加入含50%工业乙醇的0.025 mol/L H2SO4溶液浸提2次,间歇搅拌,过滤。每次浸提时间均为4 h,浸提液体积分别为25,12.5L。将两份浸提液分别减压蒸去乙醇,过滤,滤液作为吸附原液。先将第二次浸提的吸附原液以 13.5 ml/min体积流量通入250 ml HZ- 818大孔树脂柱进行吸附,再以10.6 ml/min体积流量通入第一次浸提的吸附原液。然后用500 ml 去离子水以 8.3 ml/min体积流量通入柱中洗涤。用 750 ml 工业乙醇—水(80 ∶20, pH 1.0) 进行解吸,平均体积流量6.3 ml/min。弃去刚开始流出的125 ml解吸液,收集后面的625 ml解吸液,即为利血平粗提液,用作结晶工艺研究。
2.利血平的结晶工艺
2.1 沉淀生物碱
得到利血平粗提液后,蒸去粗提液中的大部分乙醇,再加入一部分水,以减少利血平的溶解度,然后调节pH 到碱性,使包括利血平在内的生物碱沉淀,再进一步纯化。
2.2.1 加水量的选择
取5份利血平粗提液,每份25 ml,分别在50℃真空浓缩至约10 ml,加入不同体积的水,用浓 NaOH溶液调pH 至 8.0,离心,沉淀各加20 ml 丙酮,热水浴中溶解,离心,检测上清中利血平含量;沉淀再各加 10 ml 氯仿溶解,离心,检测上清中利血平含量,计算沉淀利血平的收率。
2.2.2 pH值的选择
取 5 份利血平粗提液,每份20 ml,分别在50℃真空浓缩至约7 ml。各加2倍水,用浓 NaOH 分别调至 pH 6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,离心。沉淀各加20 ml丙酮溶解,离心,检测上清中利血平含量。沉淀再各用10 ml 氯仿溶解,离心,检测上清中利血平含量,计算收率。
2.3 溶解生物碱
取5份利血平粗提液,每份20 ml,分别在 50℃真空浓缩至约 7 ml,各加 2倍水,用浓 NaOH 调至pH 8.5,离心。沉淀分别加10 ml不同比例的丙酮—氯仿溶解,离心,检测上清中利血平含量,计算收率。
2.4 沉淀胶质
取 40 ml溶解生物碱沉淀的丙酮—氯仿混合溶液,减压蒸去有机溶剂,弃去剩余的水相后,沉淀加 8 ml丙酮溶解,分成 4 等份,分别加不同体积的石油醚—氯仿(1 ∶1) ,振摇1 h沉淀胶质,离心。分别用 1 ml石油醚洗涤胶质沉淀,离心。合并两次上清液,检测上清中利血平含量。将胶质取出,放在表面皿上晾干,称重。
3 粗结晶
3.1 溶剂的选择
取 24 ml 沉胶后的上清液,分成4等份,蒸干。取 2份样品,各加入 1 ml乙酸乙酯溶解,分别浓缩至约 100μl,然后分别加入6倍乙酸乙酯液体积的甲醇或乙醇;另2份样品各加入1 ml丙酮溶解,分别浓缩至约100μl,然后分别加入6倍丙酮液体积的甲醇或乙醇。4份样品均混匀后置于4℃冰箱中20 h结晶,离心,晶体用氯仿溶解后检测利血平含量。
3.2 甲醇用量的选择
取50 ml沉胶后的上清液,分成4等份,蒸干后,分别加250μl乙酸乙酯,溶解后加入不同量的甲醇,4℃放置 20 h,离心,得粗结晶。晶体用氯仿溶解后检测利血平含量。
3.3 重结晶
取粗结晶250 mg,加过量丙酮溶解后,分成3等分,分别浓缩至2 ml,分别加入不同体积的甲醇,4℃放置20 h,离心,得结晶。结晶用氯仿溶解后检测利血平的含量。
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