蒙药地锦草总黄酮提取工艺研究(评论)

蒙药地锦草总黄酮提取工艺研究 地锦草为大戟科植物地锦Euphorbiae humifusae willd．的干燥全草。具有止血、燥湿 "协日乌素"、愈伤、清脑、清脉热的功能。用于便血、创伤出血、衄血、吐血、肺脓疡、咯 脓血痰、中风等。是蒙医常用药之一，如意至宝丸（额尔郭乌日勒）等方剂的主要药。地锦 草主要含槲皮素甙及素、山奈素甙及素、地锦草素等黄酮类化合物。其煎剂、醇提液及地锦 草素均有抗菌、止血等作用。我们曾对地锦草水提取液、乙醇提取液及总黄酮液抗自由基作 用进行研究，结果证明地锦草有很强的清除和抑制自由基的作用。为进一步研究其有效成分 ，探索地锦草总黄酮提取最适条件，为提取工艺提供信息，以总黄酮含量为考察指标，采用 正交实验等方法对地锦草总黄酮提取工艺进行了系统研究。 　　1 材料与仪器 　　药材由本院附属医院蒙药制剂室提供，经我院蒙药系鉴定教研室鉴定。均为《中国药典 》1995版本品种Euphorbiae humifusae willd．的干燥全草。芦丁对照品由中国药品生物 制品检验所提供，批号为080-9303，其它化学试剂均为AR级，实验用水为亚沸提纯水。 　　日立557双波长双光束分光光度计，754分光光度计（上海三分厂），FA160电子天平（上 海天平仪器厂），PHS-WI型智能酸度计（杭州万达仪表厂）。 　　2 实验方法 　　2．1 最大吸收波长及稳定性考察：精密量取芦丁对照品液和样品液各5．0ml，分别置 25ml容量瓶中，加水至6ml，加5％NaNO2液1．0ml，放置6min，加10％Al（NO3）3试液1．0m l，放置6min，加10％NaOH试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂作空白， 于557双光束／双波长分光光度计上进行全波长扫描，最大吸收波长为λmax500nm，同时，在 500nm波长处进行时间扫描，结果显示150min内基本稳定。 　　2．1．2 标准曲线的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品10．0mg，加 甲醇溶解，转入50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品液（0．2mg／ml）。 精密吸取该液0．0、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0、6．0ml，分别置25ml容量瓶中，加水 至6ml，加5％NaNO2试液1．0ml，放置6min，加10％Al（NO3）3试液1．0ml，放置6min，加1 0％NaOH试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15min以相应试剂作空白，于500nm处测定吸光度 。以浓度（C）与吸光度（A）进行直线回归，得回归方程为Y=0．0209+0．3467X，γ＝0．9 997。在0．20～1．20mg范围内 呈线性关系。 　　2．1．3 加样回收率测定：称取5．0g地锦草粗粉3份，精密称定，分别精密加入芦丁对 照品，按样品制备法制备，并照标准曲线制备方法测定，计算其回收率。结果见表1。 　　　　　　　　　　　　 表1 加样回收率测定结果 ---------------------------------------------------------------------- 编号 样品总黄酮量 加入量　　测得值　　 回收率（%） X±S（%） CV（%） 　　　　 （mg）　　（mg）　　（mg） ---------------------------------------------------------------------- 1　　37.0831　　5.1435　　41.3873　　97.74 2　　36.1533　　5.0111　　41.4315　　100.74　　98.77±1.71　　1.73 3　　37.1173　　5.1001　　41.4110　　97.83 ----------------------------------------------------------------------- 　　2．2 提取方法的选择 　　2．2．1 水提取法：称取地锦草粗粉5．0g，加水200ml，浸泡30min，煮沸60min，过滤 。共煎煮3次。合并滤液定容至50ml，备用。 　　2．2．2 乙醇提取法：称取地锦草粗粉5．0g，加乙醇，水浴回流1h，过滤。共提取3次 。合并滤液定容至50ml，备用。 　　2．2．3 样品液总黄酮含量测定：精密吸取样品液3．0ml，置25ml容量瓶中，按标准曲 线制备法测定吸光度，计算含量。结果见表2。 　　2．3 提取工艺条件优选：从表2可知，乙醇提取法优于水提取法，可采用正交实验设计 ，选用乙醇浓度、提取时间、提取溶剂加倍量及提取次数4因素，每个因素选择3个水平， 用L9（34）正交表进行实验设计优选。结果见表3、表4。 　　　　　　　　 表2 地锦草提取条件与含量关系 ----------------------------------------------------------------------- 试验号　　提取条件　　　　含量（x±S，%）　　　　CV（%） ----------------------------------------------------------------------- 1　　　　水提取法　　 0.1397±0.004　　　　 2.85 2　　　　乙醇提取法　　 0.7278±0.011　　　　 1.44 ----------------------------------------------------------------------- 　　　　　　表3 因素水平表 ----------------------------------------------------------------------- 水平　　　　　　　　　　　　　　　　 因素 A乙醇浓度（%） B提取时间（h） C溶剂加倍量　　D提取次数 ----------------------------------------------------------------------- 1　　 60　　　　　　 1.0　　　　　　 6　　　　　　 1 2　　 75　　　　　　 1.5　　　　　　 8　　　　　　 2 3　　 90　　　　　　 2.0　　　　　　 10　　　　　　 3 ----------------------------------------------------------------------- 　　　　　　表4 正交试验设计及结果分析 ----------------------------------------------------------------------- 表头设计 A　　 B　　 C　　 D　　 试验结果 ----------------------------------------------------------------------- 列号　　 1　　 2　　 3　　 4　　 总黄酮含量（%） ----------------------------------------------------------------------- 1　　1　　1　　1　　1　　2.674 2　　1　　2　　2　　2　　2.891 3　　1　　3　　3　　3　　3.033 4　　2　　1　　2　　3　　3.224 5　　2　　2　　3　　1　　2.538 6　　2　　3　　1　　2　　3.015 7　　3　　1　　3　　2　　2.605 8　　3　　2　　1　　3　　3.423 9　　3　　3　　2　　1　　2.64 l　　2.866　　2.834　　3.037　　2.617　　G=2.6043 l2　　2.926　　2.951　　2.918　　3.11　　 l3　　2.889　　2.896　　2.725　　3.227　　 R　　0.006　　0.0117　　0.312　　0.61　　 优水平　　A2　　B2　　C2　　D2　　 ----------------------------------------------------------------------- 　　2．4 分离精制方法的考察：称取地锦草粗粉25g，照正交实验最佳工艺A2、B2、C1、D 3进行提取，回收乙醇，加水溶解，并定容至50ml，备用。提取液作以下分离工艺考察。 　　2．4．1 方法1：取上述液10ml，于水浴蒸干，用饱和石灰乳溶解，搅拌，过滤。50～ 60℃下调pH值至1～2，放置，析出沉淀，沉淀用甲醇溶解并定容至50ml。 　　2．4．2 方法2：取上述液10ml，加饱和石灰乳调pH值10～11，放置，产生沉淀，过滤 ，滤液用HCl调整至中性，于水浴上浓缩至干，甲醇溶解，并定容至50ml。 　　2．4．3 方法3：取上述液10ml，用石油醚脱色，再用正丁醇萃取3次。减压回收正丁醇 至干，甲醇溶解，并定容50ml。 　　精密吸取总黄酮甲醇溶液，按标准曲线制备方法测定吸光度，计算含量。结果见表5。 　　　　　　 表5 精制分离条件与总黄酮含量关系 ----------------------------------------------------------------------- 试验号　　 方法　　 总黄酮含量（x±S，％）　　 CV（％） ----------------------------------------------------------------------- 1　　　　 方法1　　　　 0．3121±0．0022　　　　 0．70 2　　　　 方法2　　　　 0．0400±0．0011　　　　 2．75 3　　　　 方法3　　　　 1．6654±0．0094　　　　 0．56 ----------------------------------------------------------------------- 　　3 讨论与小结 　　从实验结果表明，乙醇提取法优于水提取法（P＜0．05）。乙醇提取最佳方法是A2、B2 、C1、D3，即用6倍量的75％乙醇回流提取1．5h，共提取3次。本方法提取的液体可用石油醚 脱色，再用正丁醇萃取3次，减压回收溶剂至干得总黄酮精制品。 　　乙醇提取工艺对地锦草总黄酮含量的主要影响因素为提取次数，其次是溶剂加倍量。按 A2、B2、C1、D3方案提取地锦草总黄酮。可增加得率59％，可充分利用低浓度乙醇，并用量 小，降低生产成本，简便。本文为中医中药网zhong-yao.net整理或转载,内容仅供参考,原作者拥有版权,转载请加上本站链接！